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1、RNA的提取方***
RNA抽取一般使用Trizol***抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol***进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。
.提取 称取鲜酵母 159或干酵母粉 5g,倒入 100ml三角瓶中,加 NaCl 5g,水25ml,搅拌均匀,置于沸水浴中提取lh。2.分离 将上述提取液用自来水冷却后,装入大离心管内,以4000r/min离心10min,使提取液与菌体残渣等分离。
常见的RNA提取方***有苯酚***、阴离子去污剂***、LiCl一尿素***、改良的Gomez***、异硫氢酸胍***、CTAB***、热硼酸***及改良热硼酸***、TRIZOL试剂快速提取***。
酵母细胞基因组RNA的提取一般可以按照以下步骤进行:提取细胞总RNA:将酵母细胞收集后用三倍体积的Trizol或RNeasy提取试剂按照说明书操作,可将总RNA提取出来。消化DNA:将总RNA加入DNase消化缓冲液,用DNaseI酶消化,将DNA降解掉。
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